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最終更新日：2024/04/10
小松 裕
コマツ ユタカ
(Yutaka KOMATSU)
共同研究・競争的資金等の研究課題
- タイトル
- 膵癌の悪性度を規定する新規分子標的の探索
- タイトル（英）
- Investigation of the novel molecular target that determine the malignant character of pancreatic cancer cells.
- 研究概要
- 膵癌細胞株を用いてSmad4のknock downもしくはrescueを行いTGF-βシグナルの標的分子の発現変化を網羅的に解析した。方法は、(1)Smad4遺伝子の完全欠失株BxPC-3にSmad4を発現させ、TGF-β刺激にて発現の変化する分子をmicroarrayを用いて抽出した。(2)Smad4正常株PANC-1のSmad4をRNAiにて恒常的にknock downし、TGF-β刺激にて発現の変化する分子をmicroarrayおよび蛋白二次元電気泳動・質量分析によるプロテオーム解析にて検出した。得られた標的分子について定量的RT-PCR、Western blot、遺伝子のプロモーター領域の転写活性化等の検討を行った。 (1)BxPC-3のarrayからは、TGF-β-Smadシグナルの代表的標的分子p21/WAF1がTGF-βによるSmad4非依存的な発現増強を示し、その機序はSmad2/3依存的な転写活性化であることが判明した。更にBxPC-3はSmad4非依存的にTGF-βによる増殖抑制を示した(Oncogene.2004 Feb 5;23(5)11043-51.)。 (2)PANC-1のSmad4恒常的knock down株を樹立した。Microarray解析ではSmad4正常株とknock down株は大きく異なる標的分子群を示した。またPANC-1由来細胞のプロテオーム解析からも以下のようにSmad4を介さない標的分子の同定に成功した(Biochem Biophys Res Commun.2004 May 21;318(1):289-96.)。この二次元電気泳動システムとスポット解析システム、MALDI-TOF/MSシステムは既に我々のグループ内では稼動している。以上抽出された分子群は細胞骨格、細胞周期の制御、酸化ストレスなどに関わるものであった。
- 研究概要（英）
- The transforming growth factor-beta (TGF-beta)-Smad signaling pathway inhibits the growth of human epithelial cells and plays a role in tumor suppression. We succeeded in establishing Smad4 knockdown (S4KD) pancreatic cancer cell lines using the stable RNA interference (RNAi) method. The S4KD and control cells were stimulated with TGF-beta and analyzed using a cDNA microarray that contained 3756 genes, in order to screen for target molecules downstream of TGF-beta. The microarray analysis revealed that 187 S4KD genes and 155 genes in the control cells were regulated immediately upon TGF-beta stimulation. Quantitative RT-PCR analysis on several of these genes produced results that corroborated the outcome of the microarray analysis. Most of the genes in the S4KD and control cells identified by the array differed, which suggests signaling pathways that differ according to Smad4 status. Of the identified genes, 246 have not been reported previously as genes that lie downstream of TGF-beta. Genes that are involved in cell proliferation, adhesion, and motility were found to be regulated differentially with respect to S4KD and control cells. Cell migration induced by TGF-beta was inhibited in the S4KD cells, which might be associated with a different regulation of integrin beta7. In a while, we compared the proteomic changes with TGF-beta stimulation using two-dimensional gel electrophoresis (2-DE) and mass spectrometry. We identified five proteins that were up-regulated and seven proteins that were down-regulated ; 10 of them were novel targets for TGF-beta. These proteins function in processes such as cytoskeletal regulation, cell cycle, and oxidative stress. Introducing siRNA-mediated gene silencing into proteomics revealed a novel TGF-beta signal pathway that did not involve Smad4.
- 参照URL
- https://researchmap.jp/utah123/research_projects/41115015
- 担当研究者
- 小松 裕,立石 敬介,川上 高幸,大塚 基之,伊地知 秀明
- 担当研究者（英）
- KOMATSU Yutaka,TATEISHI Keisuke,KAWAKAMI Takayuki,OTUKA Motoyuki,IJICHI Hieaki
- 提供機関
- 日本学術振興会
- 提供機関（英）
- Japan Society for the Promotion of Science
- 制度名
- 科学研究費助成事業 基盤研究(C)
- 制度名（英）
- Grants-in-Aid for Scientific Research Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
- 研究種目
- 基盤研究(C)
- 研究種目（英）
- Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
- 研究機関
- 東京大学
- 研究機関（英）
- The University of Tokyo
- 年月From
- 2003年
- 年月To
- 2004年
- 配分額（総額）
- 3500000
- 配分額（直接経費）
- 3500000
- 配分額（間接経費）
- 資金種別
- 課題番号
- 15590621
- KAKEN URL